Potency assay of diphtheria antitoxin in Vero cell microcultures.

Laboratory conditions were established for the titration of diphtheria toxin and antitoxin in Vero Cell Cultures (CCT) and a comparison was made with the intradermal test (IDT) as currently used throughout the world. Working dilutions and cut off values were established by reading both the change in color of phenol red used as pH indicator and changes in cell viability in the microscope. CCT shows high reproducibility and higher detectability than IDT in the titration of both WHO Reference Standard and high titer horse antisera. In sera of guinea pigs immunized for potency testing of diphtheria toxoid the titre was approximately 10 times lower than in the IDT. The explanation is a subject of speculation. The Vero cell titration might be adopted as such for titration of diphtheria antitoxin. In the case of the toxoid potency test it could be used if the limit for the titration is adjusted to 0.2 IU considering the equivalence obtained between the two tests, by taking into account a ratio of 1:10 between CCT and IDT.

Comparative biological activities of whole cell pertussis vaccine and a new acellular preparation.

The biological activities of whole-cell pertussis vaccine and a new acellular preparation were compared. It was observed that both preparations were similarly effective in inducing protection in mice against intracerebral challenge with B. pertussis, however, the acellular preparation was approximately 200-fold more potent. A close relationship between the degree of pertussis toxin purification and the increase in potency was observed. Neither preparation affected the weight gain of the animals within the doses employed. As expected, both preparations had histamine-sensitizing activity and leukocyte-promoting activity. It is suggested that this preparation, obtained using very simple methodology, can be considered as a potentially useful acellular pertussis vaccine.

Desarrollo de la produccion de inmunoglobulinas humanas especificas. III Produccion de un lote de prueba de inmunoglobulina especifica antitetanica. / Development of the production of specific human immunoglobulinas.III. Production of a test batch of antitetanic specific immunoglobulins

Se presenta un estudio para la preparacion a escala de laboratorio de inmunoglobulina humana hiperinmune antitetanica. El plasma hiperinmune se obtuvo inmunizando voluntarios con 2 esquemas de vacunacion distintos, lograndose un titulo promedio de 42,72 Ul/ml de plasma. El fraccionamiento se llevo a cabo por el metodo 6 y 9 de Cohn original. A partir de un plasma con una potencia de 39 Ul/ml se llego a una inmunoglobulina con 220 Ul/ml lo qual representa una concentracion de 5.64 veces el titulo inicial. El rendimiento a lo largo del proceso fue de 20% menos de lo reportado en otras plantas fraccionadoras lo cual se considero relativamente aceptable en una etapa inicial del trabajo. El estudio permite concluir que se cuenta con la tecnologia necesaria en el Instituto Nacional de Higiene, para la elaboracion de este producto a mayor escala

Elaboracion de una preparacion nacional de referencia de antitoxina tetanica liofilizada. / Preparation of National Standard of lyophylized tetanus antitoxin

El objectivo de este trabajo fue elaborar una preparacion de referencia de antitoxina tetanica liofilizada. El producto se preparo a partir de gamma globulina humana hiperinmune concentrada conteniendo 367 (ul/ml). La formulacion del producto fue calculada para contener 25 Ul/ampula y 5 Ul/ml al ser reconstituido con 5 ml de diluente. Se uso sacarosa como suporte y glicina como estabilizador durante la liofilizacion. La prueba de potencia del producto liofilado se efectuo mediante un estudio en colaboracion en el que participaron 3 laboratorios. Los resultados muestran que se tiene un producto de facil resuspensibilidad, esteril, con bajo contenido de humedad residual y una potencia de +/- 0.013 (desviacion estandar promedio entre los diferentes laboratorios). Con ello, podemos concluir que el producto puede ser usado como preparacion nacional de referencia

Desarrollo de la produccion de inmunoglobulinas humanas especificas. I.Titulacion de la antitoxina tetanica en el proceso de obtencion de la inmunoglobulina humana normal. / Development of the production of specific human immunoglobulins. I. Titration of tetanus antitoxin during the process for obtention of human normal immunoglobulin

Este es un estudio preliminar en el desarrollo de inmunoglobulinas especificas. En este primer trabajo se determino el titulo de antitoxina tetanica por el metodo de Ipsen en varias etapas del proceso de produccion de inmunoglobulina humana normal inespecifica por las tecnicas 6 y 9 de Cohn a partir de plasma. El estudio se efectuo en tres lotes de produccion (A, B y C). Los niveles de antitoxina en unidades internacionales de antitoxina por mililitro (UIA/ml) de cada lote, desde la materia prima hasta el producto terminado, fueron: lote A: 0.069, 0.102, 3.251 y 5.848; B; 0.140, 0.177 y 12.53; lote C:0.182 0.204, 0.331 y 3.31. Tambien se estudiaron las variaciones de volumen del producto, la concentracion de proteinas y la pureza electroforetica en cada etapa. El fraccionamiente por el metodo 6 y 9 de Cohn aumento entre 18 y 89.5 veces la potencia del producto. Estos aumentos estan de acuerdo con los requerimientos minimos de la Organizacion Mundial de la Salud que fijan un aumento minino de 10 veces

Desarrollo de la produccion de inmunoglobulinas humanas especificas. II.Comparacion de tecnicas para titulacion in vivo e in vitro de antitoxina tetanica. / Development of the production of specific human immunoglobulins. II. Comparison of techniques for in vivo and in vitro titration of tetanus antitoxin

Se compararon tres metodos para titulacion in vivo e in vitro para la determinacion cuantitativa de antitoxina tetanica en el laboratorio, con objeto de seleccionar un metodo practico para control de donadores hiperinmunizados con toxoide tetanico, en el proceso de produccion de inmunoglobulina humana antitetanica. El metodo de hemaglutinacion con globulos humanos sensibilizados con cloruro de cromo da una (excelente correlacion con la neutralizacion in vivo (r= 0.926), mejor que ELISA (r= 0.823), por lo que se considera adecuada para este trabajo